Bəlkə bir elm layihəsi üçün bir zülal denatür etmək istəyirsiniz, ya da denatürləşdirilmiş yemək haqqında oxudunuz və bunun necə işlədiyini bilmək istəyirsiniz. Denaturasiya, bir zülalın istilik, radiasiya, turşular və həlledicilər də daxil olmaqla xarici qüvvələrin təsirinə görə formasını və quruluşunu itirməsi prosesidir. Üzvi həlledicilər ümumiyyətlə zülalları denatür edir. Bir zülalın denatür edilməsinin dəqiq yolu, işləmək istədiyinizə bağlıdır, çünki hamısı fərqli səviyyələrdə fərqli denatürasiya agentləri tələb edir. Hər hansı bir zülalın çoxu denatüre edilə bilər, ancaq zülalın mühitində nəyi dəyişdirəcəyinizi bilirsinizsə.
Addımlar
Metod 1 /2: Bir Protein Denatürasyonu
Addım 1. İstilik istifadə edin
İstilik, bir zülalın denatür edilməsinin ən asan yollarından və ən çox yayılmış yollarından biridir. Sözügedən protein qidada olduqda, sadəcə yeməyi bişirmək zülalları denatür edəcək. Bir çox zülal, 100 ° C (212 ° F) və ya daha yüksək bir temperatura məruz qoyularaq denatüre edilə bilər. Bu, zülalların pıhtılaşmasına və həll olma qabiliyyətini azaltmasına imkan verir.
Maruz qalma müddəti istiliyə məruz qaldığınız şeydən asılıdır. Bir yumurta, məsələn, beş dəqiqə ərzində orta istilikdə bir tavada bişirilə bilər, qızardılmış isə sobada bişirmək üçün saatlar çəkə bilər
Addım 2. Alkoqol tətbiq edin
Alkol, bir peptid bağının amid qrupları arasında meydana gələn hidrogen bağlarını pozur. Bir protein bir spirt həllinə məruz qaldıqda, spirt molekulları protein zənciri ilə yeni bağlar qurur. Bakteriyaların hüceyrə divarını sındırmaq və zülalı denatür etmək üçün 70% spirtli bir həll istifadə edin.
Konsentrat spirtlər həm yanıcı, həm də zəhərli olduğu üçün təhlükəli ola bilər. Həmişə əlcəklər və göz qoruyucuları daxil olmaqla tam təhlükəsizlik avadanlığı geyin və təhlükəsiz, temperatur nəzarətli bir mühitdə işləyin
Addım 3. pH dəyişdirin
Zülalın duz körpülərini bir -birinə bağlayan ion bağlarını pozduqları üçün bir zülalın daxili quruluşu çox asidik və ya çox qələvi olduqda parçalana bilər. Proteinə bir turşu və ya əsas həll əlavə edin. Denaturasiyanı təşviq etmək üçün ətraf mühit pH 10 -dan yuxarı və ya 4 -dən aşağı olmalıdır. Əgər dəyişikliyi turşu ilə induksiya edirsinizsə, pH 2 ilə 5 arasında olmalıdır.
PH -ın dəyişdirilməsi o amin turşusundakı hər bir funksional qrupun pKa -ndan asılı olaraq bir amin turşusunu ionlaşdıra bilər. Amin turşusunda olan amin qrupunu və ya karboksil qrupunu da ionlaşdıra bilərsiniz
Addım 4. Ağır metal duzlarını sınayın
Ağır metallar zülaldakı bağları pozaraq quruluşunu itirə bilər. Civə və qurğuşun kimi ağır metalların duzları fərqli zülalları denatür etmək üçün istifadə edilə bilər. Bu cür duzlar əksər kimyəvi tədarükçülərdə mövcuddur və əlcəklər və göz qoruyucuları da daxil olmaqla hər zaman ehtiyatla və müvafiq təhlükəsizlik vasitələri ilə istifadə edilməlidir.
Ağır metallar kompleks yaratmaq üçün bir zülalın funksional yan zəncir qrupları ilə qarşılıqlı əlaqə qura bilər. Ağır metallar da zülalın amin turşusu yan zəncirlərini oksidləşdirir
Metod 2 /2: Proteinlərin Renatürasiyası
Addım 1. Bir zülalın yenidən qatlana biləcəyini təyin edin
Bəzi denatürasiya formaları qalıcıdır, digərləri isə ləğv edilə bilər. Məsələn, bir yumurta və ya ət bişirməyi geri qaytarmaq mümkün deyil, lakin yüksək pH -ya məruz qalan bir protein daha neytral bir mühitdə qoyulduqda şəklini bərpa edə bilər.
Proteinin yenidən qatıla biləcəyi DNT -dən asılı olacaq. DNT, proteinin doğma vəziyyətinə qayıtması üçün lazım olan məlumatları saxlayacaq
Addım 2. Denatürasiya faktorunu çıxarın
Zülal ətrafındakı mühiti durğunluğa qaytarın və denaturing elementini çıxarın. Məsələn, turşunu və ya bazanı çıxarın və ya zülalı daha məqbul bir temperatura gətirin.
Addım 3. Renaturasiya dəsti istifadə edin
Bir çox laboratoriya təchizatı şirkəti, renaturasiyanı təşviq etmək üçün ən yaxşı parametrləri araşdırmağa imkan verən renaturasiya dəstləri satır. Bir laboratoriyada və ya təcrübə şəraitində zülallara baxırsınızsa, bu cür dəstlər xüsusilə faydalı ola bilər.
İpuçları
- Denatüre bir protein, doğma vəziyyətində görünən dördüncü, üçüncül və ikincil quruluşunu itirir, ancaq birincil quruluşu qalacaq.
- Denatüre bir protein, bəzi hallarda, fermentlərdə olduğu kimi, bioaktivliyini də itirir, iş qabiliyyətini itirir. Məsələn, substratlar artıq denatüre edilmiş fermentlərə bağlana bilməyəcək.
- Denatüre edilmiş zülal bir məhlulda həll olma qabiliyyətini itirə bilər.
- İpləri ayırmaq üçün laboratoriya üsullarından istifadə edərək nuklein turşularını da denatür edə bilərsiniz.
